SP Beadose HP琼脂糖

产品货号：

GS4825

中文名称：

SP Beadose HP琼脂糖

英文名称：

SP Beadose HP

产品规格：

25mL|100mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

Q/SP Beadose HP琼脂糖是强离子交换剂。它们基于刚性，高度交联的珠状琼脂糖，平均珠粒直径为34μm。

产品特点

该产品保留了天然多糖化合物极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有高离子交换容量，无非特异性吸附，高分辨率，快流速操作等特点。

产品应用

广泛用于蛋白质、核酸、多肽及多糖等的生物大分子实验室规模制备和生物制药、生物工程的大工业化制备。

基本信息

树脂类型	Q Beadose HP琼脂糖	SP Beadose HP琼脂糖
产品编号	GS4368	GS4825
离子交换类型	强阴离子	强阳离子
电荷	-N⁺(CH₃)₃	SO₃^-
总离子载量	0.14～0.20mmol Cl^-/mL	0.15～0.20mmol H⁺/mL
结合能力	70mg BSA/mL树脂	55mg RNase/mL树脂
推荐使用流量	30~150cm/h
耐压	0.5 MPa(5 bar,70 psi)
平均粒径	34μm(25～48μm)
分子排阻范围	IgG 4×10⁶
基质	6%高度交联的琼脂糖
pH稳定性	1～14(短期),2～12(长期)	3～14(短期),4～13(长期)
化学稳定性	8M尿素，6M盐酸胍，70%乙醇，1M NaOH和1M乙酸
保存缓冲液	20%乙醇(Q)；0.2M乙酸钠、20%乙醇(SP)

组分	25mL	100mL
SP Beadose HP琼脂糖	25mL	100mL
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，不可冻存

纯化流程

Buffer的准备：
所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
原则上离子交换是低盐结合高盐洗脱，Binding Buffer根据您需要的结合pH条件选择在这个pH下最适的缓冲液，常规有磷酸盐，Tris，碳酸盐，醋酸盐等，推荐浓度10～100mM。
Wash Buffer与Elution Buffer在Binding Buffer的基础上补加氯化钠，可以设定不同氯化钠梯度进行洗杂洗脱，推荐的浓度是0.1M，0.3M，0.5M，1M。建议做样品小试，以确定最佳洗杂洗脱浓度。
- 对于Q Beadose HP琼脂糖来说，Binding Buffer必须至少高于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。
- 对于SP Beadose HP琼脂糖来说，Binding Buffer必须至少低于待结合分子的等电点(pI)一个pH单位。不同pH值的缓冲液可以参考表2和表3。
样品准备：样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
样品纯化：
以Q Beadose HP为例
- 将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的Binding Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
- 将样品加到平衡好的Q Beadose HP中(保证目的蛋白与Q Beadose HP充分接触，提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
- 使用10～15倍柱体积的Wash Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
- 使用5～10倍柱体积的Elution Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
- 依次使用3倍柱体积的Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
SDS-PAGE检测：
将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品用SDS-PAGE检测纯化效果。

离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。

在位清洗(CIP)：
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法：
用2倍柱体积的1M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的1×PBS,pH7.4清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：
用3～4倍柱体积的70%乙醇或3～4倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的1×PBS,pH7.4清洗。
去除一些离子键结合物质：
用3～4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的1×PBS,pH7.4清洗。

问题	原因分析	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	按照上述方案进行树脂清洗。
柱子反压过高	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤
洗脱样品较杂	树脂重复多次使用	按照上述方案进行树脂清洗或更换新的填料
洗脱样品较杂	平衡不充分	增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂

表2．建议用于Q Beadose HP琼脂糖的缓冲液

缓冲液	反离子	浓度(mM)	pKa(25℃)
N-甲基哌嗪	Cl^-	20	4.8
哌嗪	Cl^-，HCOO^-	20	5.7
L-组氨酸	Cl^-	20	6.0
Bis-Tris	Cl^-	20	6.5
1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷	Cl^-	20	6.8
三羟乙基胺	Cl^-，CH₃COO^-	20	7.8
Tris	Cl^-	20	8.1
N-甲基二乙醇胺	Cl^-，CH₃COO^-，SO₄^2-	50	8.5
二乙醇胺	Cl^-	20(pH8.4) 50(pH8.8)	8.9
1,3-丙二胺	Cl^-	20	8.6
乙醇胺	Cl^-	20	9.5
哌嗪	Cl^-	20	9.7
1,3-丙二胺	Cl^-	20	10.5

表3．建议用于SP Beadose HP琼脂糖的缓冲液

缓冲液	反离子	浓度(mM)	pKa(25℃)
柠檬酸盐	Na⁺，Li⁺	20	3.1
乙酸盐	Na⁺，Li⁺	50	4.8
丙二酸盐	Na⁺，Li⁺	50	5.7
磷酸盐	Na⁺	50	7.2
N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸	Na⁺	50	8.4

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